尊龙凯时的婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒（CAT#: 15-18620）专为检测婴儿利什曼虫设计，适用于低温运输并应在-20℃保存，产品保质期为一年。该试剂盒能够检测导致内脏利什曼病（黑热病）的婴儿利什曼原虫（Leishmania infantum），并已有研究表明，无症状感染的犬只可以在疾病传播中发挥作用。

产品特点

本试剂盒具备以下显著特色：

• 即开即用，用户仅需提供DNA模板。
• 包括阳性对照，用于区分假阴性样品。
• 反应迅速，具有高灵敏度。
• 支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR，适用于科研用途。

规格及成分

尊龙凯时的试剂盒包含以下成分：

• 2×Probe qPCR Mix (编号：190504a，规格：600μL)
• DEPC-H2O (编号：180701，规格：1 mL)
• 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液 (编号：15-18620yp，规格：90μl)
• 婴儿利什曼虫qPCR阳性对照 (浓度：1×10E8拷贝/μL，编号：18620pc，规格：50μl)
• 使用手册 (编号：15-18620sc，数量：1份)

运输及保存

本试剂盒需在低温条件下运输，并应保存在-20℃。阳性对照需单独存放，以避免污染其他试剂。同时，用户需自备样品DNA及超纯水。

使用方法

一、DNA提取

使用自选方法提取纯化样品DNA，试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为避免污染，请在独立区域进行以下稀释操作：

• 标记6个离心管为7、6、5、4、3、2。
• 在每个离心管中加入45μL DEPC-H2O。
• 在7号管中加入5μL阳性对照，震荡后得到标准曲线样品。
• 重复上述步骤，直到获得6个稀释度样品。
• 若不制作标准曲线，将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制

如有N个待测样品，需准备N+2个qPCR管，按以下成分分别加入各管中：

• 2×Probe qPCR Mix：各10 μL
• 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液：各15 μL
• DEPC-H2O：65 μL

四、添加模板

向qPCR管中加入2 μL模板，顺序为阴性对照、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪器中，进行以下扩增程序：

• 预变性：95℃，3分钟
• qPCR反应（循环次数：40）：
  • 95℃，15秒
  • 58℃，20秒
  • 72℃，20秒（采集FAM通道的荧光信号）

六、结果分析

若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，以推算样品DNA浓度。若未制作标准曲线，则根据Ct值判断结果：

• 阳性对照：Ct值<30，有明显指数增长。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值。
• 样本检测结果：根据Ct值判断阳性或阴性，并在特定范围内进行复检。

关联产品

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